home *** CD-ROM | disk | FTP | other *** search
/ The Arsenal Files 6 / The Arsenal Files 6 (Arsenal Computer).ISO / health / med9603.zip / M9630251.TXT < prev    next >
Text File  |  1996-02-27  |  4KB  |  62 lines
  1.        Document 0251
  2.  DOCN  M9630251
  3.  TI    Inactivation of human immunodeficiency virus type 1 reverse
  4.        transcriptase by oltipraz: evidence for the formation of a stable
  5.        adduct.
  6.  DT    9603
  7.  AU    Chavan SJ; Bornmann WG; Flexner C; Prochaska HJ; Molecular Pharmacology
  8.        and Therapeutics Program, Memorial; Sloan-Kettering Cancer Center, New
  9.        York, New York 10021, USA.
  10.  SO    Arch Biochem Biophys. 1995 Dec 1;324(1):143-52. Unique Identifier :
  11.        AIDSLINE MED/96095703
  12.  AB    Oltipraz (5-pyrazinyl-4-methyl-1,2-dithiole-3-thione), which is
  13.        undergoing clinical evaluation as an anticarcinogen, also inhibits HIV-1
  14.        replication (IC50 approximately equal to 10 microM). The inactivation of
  15.        RT appears to be a relevant antiviral mechanism since oltipraz blocks
  16.        viral replication in acutely infected T-cell lines, but is ineffective
  17.        in chronically infected ACH-2 cells (H. J. Prochaska, W. G. Bornmann, P.
  18.        Baron, and B. Polsky (1995) Mol. Pharmacol. 48, 15-20). Since a
  19.        nucleophilic amino acid is a likely target for oltipraz, we assessed
  20.        whether the conserved cysteine residues of HIV-1 RT (38Cys or 280Cys)
  21.        were the target(s) for oltipraz, and we synthesized [Me 14C]oltipraz to
  22.        determine if oltipraz forms a stable adduct with RT. Thus, HIV-2 RT as
  23.        well as wild-type, 38Cys-->Ser, 280Cys-->Ser, and the Cys-->Ser double
  24.        mutant of HIV-1 RT were purified from the lysates of transformed
  25.        Escherichia coli strain DH5 alpha (A. Hizi, M. Shaharabany, R. Tal, and
  26.        S. H. Hughes (1992) J. Biol. Chem. 267, 1293-1297) via a purification
  27.        procedure that included (NH4)2SO4 fractionation followed by gel
  28.        filtration, dye-ligand, and ion-exchange chromatographies. Procion
  29.        yellow H4R was chosen as the dye-ligand chromatography since it was the
  30.        most potent and selective inhibitor of RT among seventy reactive dyes
  31.        that were screened. Mono Q anion-exchange chromatography with
  32.        diethanolamine (pH 9) resulted in the generation of heterodimeric RT
  33.        from a predominantly homodimeric enzyme preparation. Because the
  34.        instability of dilute RT preparations at room temperature rendered the
  35.        kinetic evaluation of inactivation difficult, we sought to identify
  36.        conditions that prevent denaturation of these enzymes. High
  37.        concentrations (25 mM) of MgCl2 had a stabilizing effect. Oltipraz
  38.        behaved kinetically as an irreversible inhibitor of all RTs purified,
  39.        and the kinetic constants for the inactivation of these enzymes were not
  40.        significantly different from wild-type HIV-1 RT (Ki = 17.0 +/- 4.1
  41.        microM; k3 = 0.214 +/- 0.051 h-1). In stark contrast, oltipraz neither
  42.        inhibited nor inactivated the Klenow fragment of DNA polymerase I, whose
  43.        subdomain structure is similar to the p66 subunit of RT. Wild-type RT
  44.        was incubated with 60 microM [Me 14C]oltipraz for 4 h and was then
  45.        subjected to gel filtration chromatography. The [14C] label comigrated
  46.        with RT with a stoichiometry of binding of 0.88 +/- 0.05 oltipraz per
  47.        inactivated RT subunit (N = 3 experiments), and the [14C] label remained
  48.        bound after treatment with 4 M urea.(ABSTRACT TRUNCATED AT 400 WORDS)
  49.  DE    Antiviral Agents/METABOLISM/*PHARMACOLOGY  Binding Sites
  50.        Chromatography, Affinity  Comparative Study  DNA Polymerase I/DRUG
  51.        EFFECTS  Enzyme Stability/DRUG EFFECTS  Escherichia coli/GENETICS
  52.        HIV-1/*ENZYMOLOGY/GENETICS  Kinetics  Magnesium/PHARMACOLOGY  Mutation
  53.        Pyrazines/METABOLISM/*PHARMACOLOGY  Recombinant
  54.        Proteins/BIOSYNTHESIS/DRUG EFFECTS/ISOLATION & PURIF  Reverse
  55.        Transcriptase Inhibitors/METABOLISM/*PHARMACOLOGY  RNA-Directed DNA
  56.        Polymerase/*DRUG EFFECTS/GENETICS/ISOLATION &  PURIF/METABOLISM
  57.        Support, U.S. Gov't, P.H.S.  JOURNAL ARTICLE
  58.  
  59.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  60.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  61.  
  62.